Cette technique
permet de trier les cellules sur plusieurs
paramètres simultanément. Analyse très rapide.
- Elle consiste à faire défiler très rapidement
(plusieurs milliers/seconde) les unes derrière les autres,
des cellules en suspension monocellulaire devant un faisceau laser
Pour chaque cellule, sont mesurées très précisément : la fluorescence
émise à diverses longueurs d'ondes (jusqu'à 5 signaux de fluorescence
analysés simultanément ) et la lumière diffusée, recueillie dans 2
directions différentes (l'une peut être corrélée avec la taille et
la seconde avec la réfringence de la cellule).
- L'appareil peut ainsi analyser les cellules
selon plusieurs paramètres, et définir des "sous populations"
homogènes pour les regrouper selon des critères choisis. Pour chaque
sous population on peut calculer l'effectif, le % qu'il représente
par rapport à la population totale, la moyenne de chacun des paramètres,
les écarts standards, etc. On peut également voir si deux paramètres
sont liés entre eux (coefficient de corrélation...).
- Chaque sous population peut être séparée
physiquement de l'ensemble.
- Selon la spécificité des réactifs fluorescents
utilisés pour colorer les cellules, on a accès à l'étude quantitative
de nombreuses caractéristiques : présence d'un antigène, quantité
d'ADN ou d'ARN, activité enzymatique, viabilité, etc. Tous ces critères
peuvent être mis en corrélation. L'avantage de cette technique est
de réaliser des analyses précises sur des critères très différents
et très nombreux, de séparer les cellules (y compris clonage et tri
de populations très rares) avec une très grande pureté en condition
stérile, de ne pas abimer les cellules.
- Par contre, les cellules doivent être impérativement
mises en suspension. Leur nombre pour envisager une analyse
doit être de quelques centaines de milliers au minimum. De plus, on
ne possède pas d'image des cellules analysées (seulement une quantification
en unités arbitraires de chaque paramètre mesuré); on ne peut donc
localiser le signal mesuré dans la cellule. Enfin, chaque cellule
n'étant analysée qu'à un unique instant donné, on ne peut faire de
véritable étude cinétique portant sur une même cellule.
- Les applications sont très diverses.. : l'étude
des marquages immunofluorescents, , activité enzymatique, flux ioniques,
typage lymphocytaire etc.
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